Interaction between SPAG6 and TAC1 proteins
Min, J.; Li, M.-Y.; Liu, Y.-H.; Liu, J.-P.; Shuang, C.-F.; Zhang, L.; Zhang, Z.-B.
Zhonghua Nan Ke Xue 22(12): 1059-1064
2016
ISSN/ISBN: 1009-3591 PMID: 29282908 Document Number: 687985
目的： 构建速激肽1（Tac1）基因真核表达载体并探讨其与精子相关抗原6（SPAG6）之间的相互作用。方法： 提取10只昆明雄性小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、睾丸8个组织的RNA，逆转录成cDNA后，用RT-PCR法观察Tac1在各组织中的表达。构建Tac1/pGADT7、Tac1/pEGFP-N2重组质粒，将Tac1/pEGFP-N2转染至CHO和COS-1细胞，采用免疫荧光染色及Western印迹检测TAC1在细胞中的定位和蛋白表达。将Tac1/pGADT7与Spag6/pGBKT7进行酵母双杂交实验，提取酵母蛋白用Western印迹检测TAC1与SPAG6之间是否存在相互作用。 结果： Tac1主要在睾丸、脑、心脏中表达。酶切和测序鉴定表明Tac1重组质粒构建成功，酶切鉴定片段390 bp。TAC1单独转染时，定位于CHO细胞的整个胞体，与SPAG6质粒共转染后，TAC1被募集至细胞微管中表达，用Western印迹检测到相对分子质量约为40 000的融合蛋白表达。与SPAG6的酵母双杂交实验显示TACl/SPAG6在缺少3种氨基酸（Leu、Trp、His）的培养板上有菌落生成，经Western印迹证实酵母融合蛋白中含有TAC1和SPAG6。结论： 成功构建Tac1重组质粒，并利用该质粒证实了TAC1与SPAG6之间存在相互作用关系。.